纳贡毕力格  吴伟红  乌云斯日古楞  道日敖  那日苏*  白香辉 内蒙古国际蒙医医院心身医学科 

［摘要］本研究目的为筛选内蒙古地区寻常型银屑病中被调节的miRNA，为蒙医心身互动疗法对寻常型银屑病预防与治疗提供科学依据。银屑病是一种以遗传因素与环境因素相互作用的多基因遗传病，发病率有区域性。有研究发现40多个银屑病易感基因，并且从银屑病患者皮肤组织中检测到表达有变化的miRNA。银屑病也属与心身疾病范畴。蒙医心身互动疗法是以传统蒙古族医学思想为起点、融合西方心身医学精髓的一种心理疗法，治疗银屑病的疗效显著，有效率高达95%-98.97%。我们发现蒙医心身互动疗法干预内蒙古地区寻常型银屑病患者后的血清中有6个表达上调的miRNA。其中miR-451、hsa-miR-223-3p、hsa-let-7g-5p的有关研究支持它们的参与银屑病患者抑郁情绪和皮肤细胞增殖和分化等生物学过程相关的可能性，因此，我们认为研究靶向miR-451、hsa-miR-223-3p、hsa-let-7g-5p治疗银屑病有可能有助于提高银屑病的临床疗效。

[关键词]内蒙古地区；银屑病；蒙医心身互动疗法；miRNA；

   银屑病是一种遗传因素与环境因素相互作用的多基因遗传病，以角质形成细胞过度增殖和异常分化及炎性细胞浸润为主要特征，是一种常见的皮肤增殖的心身疾病。银屑病患者发病率具有地区性，占全世界人口的2%-4%，在中国发病率为0.59%，银屑病也是困扰内蒙古地区人群的一种常见疾病，内蒙古地区银屑病发病率有可能与内蒙古地区寒冷气候有关，但对此病的发生、发展一直欠缺系统的研究。

银屑病皮肤损伤部位的特征是角化不全细胞下方颗粒层细胞减少或完全消失，棘层细胞增厚。我们推测它们可能是皮肤损伤部位的表皮干细胞分化功能障碍而形成的。因某种原因银屑病患者的表皮干细胞分泌的异常细胞因子可能促进棘层细胞增生、角质形成细胞增殖和起减弱细胞凋亡的作用。因此，假如能够发现可以抑制表皮干细胞的增殖，异常分泌，分化作用的miRNA和患者心理障碍（抑郁、焦虑情绪）密切相关的miRNA，很可能会提高治疗银屑病的疗效。

   miRNAs在银屑病皮损组织和血浆中异常表达，不同的miRNA可通过多种信号传导通路参与银屑病的发生发展。实验证据表明，miRNA主要通过与靶标基因3’UTR中的靶序列完全或不完全配对，引发靶标基因mRNA的降解或抑制其翻译，从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动。在银屑病研究中发现，银屑病患者皮肤组织中检测到表达增高的miR-203、miR-146、miR-22、miR-24-1、miR-498、miR-551a、miR-221[7,9,10]，其中miRNA-203表达增高引起SOCS-3的减少。从而引发STAT3的激活导致表皮细胞的增生和炎症。miR-146a表达在CD4+，CD25+T细胞和粒细胞-巨噬细胞中增高，同时靶向于TNF-a的抑制因子TNF receptor-associated factor6和IL-1 receptor-associated kinase。但是不同民族、不同地区的银屑病易感基因也不同。我们从内蒙古地区银屑病患者血液中发现的miRNA与唐雪勇、梁育及其他研究结果有所不同也证明了这一点。目前内蒙古地区银屑病患者的相关miRNA研究尚欠缺，需待研究。

   本研究以蒙医心身互动疗法作为干预寻常型银屑病（银屑病）的手段，以心理与躯体作为干预手段靶标，为克服银屑病治疗过程中复发率高、副作用多等现状，对内蒙古地区银屑病人群的内在发病机制做较为深入的研究，以及对内蒙古地区银屑病人群的预防、治疗提供新线索。

1．资料

1.1研究资料：受试者年龄为10-66岁之间。其中男性26人，占总人数的63%；女性15人，占总人数的37%。

1.2研究方法

1.2.1  SCL-90心理测验法

1.2.2  症状分级法：根据《中医对22种技术的95病种的治疗和诊断计划》（修订版）中的银屑病病诊断和治疗计划而编写的。

1.2.3 PASI检验法

1.3诊断标准

1.3.1蒙医银屑病诊断标准；蒙医病症诊断疗效标准

1.3.2西医诊断标准；病理诊断标准（Diagnostic Pathology）(西医)

2.治疗方法

治疗方法是蒙医心身互动疗法。蒙医心身互动疗法属心理疗法范畴，它是基于蒙医心身统一理论，以心理治疗为主，以蒙古族文化（歌、舞、音乐、讲故事）作为治疗手段，结合养生和药物治疗为特征的综合性治疗方法。单疗程21天。

3.统计学处理

运用SPSS18.0统计学软件进行统计学处理。

4.临床疗效评价研究结果

4.1回顾性研究疗效情况：用蒙医心身互动疗法治疗本科室门诊及住院银屑病患者回顾性调查研究（表1、2）

　　 表2  2013-2017之间住院患者临床疗效评价研究

民族	性别	人数	治愈	好转	总有效率
蒙古族	男	138	无	99.27%	98.97%
	女	90	1.11%	96.66%
汉族	男	34	2.94%	97.05%
	女	32	无	100%

　　表1-2参加回顾性调查者门诊患者92例、住院患者294例，结果现实好转率达到97.05%-99.27%,总有效率达到97.8%-98.97%。

　　4.2 前瞻性研究疗效情况：参加前瞻性研究的41名银屑病患者进行蒙医心身互动疗法治疗。其中男26人，女15人。治疗之前均做病理进行确诊（图1）并症状前后对比，记录于PASI量表，最后结果用网络软件计算（pasi，cort i.li）（表1）。表2基础研究自愿提供血清样本的患者基本情况、病程、病情程度、疗程等。

　　a.病理诊断情况：银屑病病理诊断结果：表皮角化过度伴角化不全，可见Munro脓肿，颗粒层减少或消失，棘层肥厚，上皮脚规则延长增宽，乳头上方表皮变薄，表皮灶状细胞间水肿，可有海绵水中形成，真皮浅层血管扩张，迂曲，炎细胞浸润等特点。　 

　　b.临床疗效

　　                           表3 PASI检测结果

　　表3结果显示，95%以上治愈为20%，70%以上治愈为29%，30%以上有效为46%，无效为5%。总有效率达到95%。

　　初起为炎性红色丘疹，约粟粒至绿豆大小，以后逐渐扩大或融合成为棕红色斑块，边界清楚，周围有炎性红晕，基底浸润明显，表面覆盖多层干燥的灰白色或银白色鳞屑。轻轻刮除表面鳞屑，逐渐露出一层淡红色发亮的半透明薄膜，称薄膜现象。再刮除薄膜，则出现小出血点，称点状出血现象。（图2A所示）

　　5.机制研究结果情况

　　a.参加前瞻性研究的41名银屑病患者中参与基础研究者的基本情况疗效情况（表4）

　　表4 治愈患者基本情况

患者	A	B	C	D	E	F	G	H	I
性别	男	男	男	男	男	男	男	男	男
年龄	18	30	33	21	17	50	18	45	54
病情程度	46	3	3.1	3.6	6.2	39.6	45.6	22.2	65.6
病程	1	4	15	6	2	30	2	33	45
疗程	16	18	22	38	21	83	62	43	91
治愈率%	100	100	100	100	100	97	96	96	95

　　表4结果显示病情的严重程度、病程与治疗疗程有直接关系。研究表明病情轻、病程短的治疗疗程短，相反病情越严重、病程越长的治疗疗程越长，这符合银屑病越严重时蒙医的三根七素的紊乱越复杂、病程越长巴达干越偏盛、病情越顽固治疗疗效越不显著的理论。

　　b.血清miRNA检测结果

　　1）图3A，B，C，D四个对照组之间血清miRNA表达整体情况（A：健康人，B：治疗前，C：治疗后，D：C组的治疗前）  

　　图3显示A与D，C与D对照中血清miRNA表达具有明显差异。

　　2）图4A与D，C与D对照中p≥0.005,倍数≥2的miRNA表达情况（A：健康人，C：治疗后，D：C组的治疗前

　　图4结果显示 A与D对照中银屑病患者血清中15个miRNA上调，19个miRNA下调；C与D对照中13个miRNA上调，10个miRNA下调p≥0.005,倍数≥2。

　　3）以下（图4）两组中共存的治疗前后被调节方向一致的基因芯片中信号最强的利用PCR验证的13个miRNA表达倍数情况。

　　表5利用PCR验证的13个miRNA表达倍数

　　4）以下定量PCR验证候选miRNA的表达情况

　　表6利用定量PCR验证候选miRNA结果

Systematic 　　Name	before 　　AVG-adj 　　2-ΔCt	after 　　AVG-adj 　　2-ΔCt	N 　　AVG-adj 　　2-ΔCt	Before／N	After 　　／N	Before 　　／after	Before/ after
hsa-miR-7845-5p	0.14	0.07	0.18	0.77	0.38	2.03	-/-
hsa-miR-6068	0.05	0.03	0.07	0.83	0.45	1.86	-/-
hsa-miR-572	0.81	0.45	0.71	1.14	0.63	1.81	+/-
hsa-miR-494-3p	92.75	38.27	70.73	1.31	0.54	2.42	+/-
hsa-miR-451a	3.99	4.68	1.91	2.1	2.45	0.29	+/-
hsa-miR-371b-5p	0.40	0.25	0.49	0.82	0.51	1.60	-/-
hsa-miR-320a	1.08	0.53	0.83	1.30	0.63	2.05	+/-
hsa-miR-26b-5p	0.14	0.05	0.14	1.03	0.38	2.74	+/-
hsa-miR-223-3p	0.37	0.14	0.19	1.96	0.72	2.74	+/-
hsa-miR-16-5p	3.89	3.38	4.06	0.96	0.83	1.15	-/-
hsa-miR-1246	3.73	3.34	3.79	0.98	0.88	1.12	-/-
hsa-miR-1227-5p	4.86	4.23	5.83	0.83	0.73	1.15	-/-
hsa-let-7g-5p	0.1	0.06	0.07	1.36	0.77	1.77	+/-

　　表6 PCR结果显示被验证的13个miRNA中hsa-miR-572、hsa-miR-494-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-223-3p、hsa-let-7g-5p等6个miRNA表达同基因芯片结果治疗前上调、治疗后下调。

　　6.讨论

　　银屑病是一种常见的以皮肤瘙痒为主的慢性炎症性皮肤病。特征性损害可见有多层鳞屑，以头皮四肢多见并可扩散到全身，有些还可在口腔、生殖器等器官上出现，头皮上的鳞屑则可表现为头发成团块样（图2）。有些患者可伴有指甲改变，严重者甚至可有皮疹灼热、皮肉裂开以及疼痛加重的感觉，并会有失眠、情绪低落等症状。银屑病是一种典型的以损害躯体和心理为特征的心身疾病。因此，我们着重着手患者的躯体症状和心理因素两方面，应用蒙医心身互动疗法诊疗银屑病并展开研究。

　　我们的临床疗效评价研究结果显示参加回顾性调查者92例门诊患者、294例住院患者，结果显示好转率达到97.05%-99.27%，总有效率达到97.8%-98.97%并在表3结果中显示，95%以上治愈率为20%，70%以上治愈率为29%，30%以上有效率为46%，总有效率达到95%。以上结果证明了蒙医心身互动疗法治疗银屑病疗效的可靠性（表1、2、3）。

　　我们的机制研究结果显示 A与D对照中银屑病患者血清中15个miRNA上调，19个miRNA下调；C与D对照中13个miRNA上调，10个miRNA下调p≥0.005,倍数≥2（图4）。甚至PCR结果显示被验证的13个miRNA中hsa-miR-572、hsa-miR-494-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-223-3p、hsa-let-7g-5p等6个miRNA表达同基因芯片结果治疗前上调、治疗后下调（表6）

　　本研究以临床疗效评价研究和研究其治疗机制等两方面着手展开工作，临床疗效评价研究明确了蒙医心身综合疗法治疗银屑病的疗效的可靠性，机制研究展示出了其治疗银屑病的机制是通过银屑病患者血清miRNA表达调节而发挥它的疗效的可能性。最近的研究报道有力支持我们的假设。如：1）miR-451、miR-320a、hsa-miR-223-3p与抑郁症患者发病有关[15]，因此，它有可能与银屑病患者的抑郁情绪有关；2）miR-494-3p具有促进细胞分化与老化的功能[16]，因此，其有可能与银屑病的棘层细胞增生有关；3）let miRNA家族在多种干细胞和祖细胞中微量表达甚至不表达[17]，我们的研究发现银屑病患者血清中miR-let-7的高表达，因此，我们假设miR-let-7形成通路影响表皮干细胞的分化。由此，我们认为在本项研究中有可能发现参与银屑病患者情绪及皮肤细胞增殖和分化等生物学过程相关的miRNAs，我们下一步研究hsa-miR-572、hsa-miR-494-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-223-3p、hsa-let-7g-5p是否调控情绪、抑制皮肤细胞的增殖和分化等功能，阐明内蒙古地区银屑病人群的内在发病机制。

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　　* 通讯作者：那日苏，博士研究生，主治医师，科室副主任，内蒙古国际蒙医医院，邮箱：bnarisu@163.com；联系电话：15248079129